Ինչպես քերել բիծը (նկարներով)

Բովանդակություն:

Ինչպես քերել բիծը (նկարներով)
Ինչպես քերել բիծը (նկարներով)

Video: Ինչպես քերել բիծը (նկարներով)

Video: Ինչպես քերել բիծը (նկարներով)
Video: Ремонт магазина 600 м2 . Супер Сложная Укладка Плитки . Весь объект за 60 минут. г.Дубна 2024, Երթ
Anonim

Գրամի ներկումը արագ ընթացակարգ է, որն օգտագործվում է հյուսվածքների նմուշներում բակտերիաների առկայությունը որոնելու և բակտերիաները որպես գրամ-դրական կամ գրամ-բացասական բնութագրելու համար `հիմնվելով նրանց բջջային պատերի քիմիական և ֆիզիկական հատկությունների վրա: Գրամի բիծը գրեթե միշտ պետք է արվի որպես մանրէային վարակի ախտորոշման առաջին քայլ:

Գրամի բիծն անվանվել է դանիացի գիտնական Հանս Քրիստիան Գրամի (1853 - 1938) անունով, ով տեխնիկան մշակել է 1882 թվականին և հրապարակել այն 1884 թվականին ՝ որպես տեխնիկական տարբերակիչ նմանատիպ կլինիկական ախտանիշներով երկու տեսակի բակտերիաների միջև տարբերություն. Streptococcus pneumoniae (հայտնի է նաև որպես pneumococcus) և Klebsiella pneumoniae բակտերիաները:

Քայլեր

Մաս 1 -ից 3 -ից. Գրամ բիծ պատրաստելը

Գրամի բիծ Քայլ 1
Գրամի բիծ Քայլ 1

Քայլ 1. Պատրաստվեք լաբորատոր աշխատանքի:

Հագեք ձեռնոցներ և կապեք երկար մազերը ՝ կանխելու համար մանրէների նմուշը, որը դուք փորձարկելու եք: Ախտահանեք աշխատանքային տարածքը ծխի ծածկույթի տակ կամ մեկ այլ լավ օդափոխվող տարածքում: Սկսելուց առաջ ստուգեք, որ բունսենի այրիչն ու մանրադիտակը գործում են:

Գրամի բիծ Քայլ 2
Գրամի բիծ Քայլ 2

Քայլ 2. Ստերիլացրեք ապակե մանրադիտակի սահիկը:

Եթե ապակու սահիկը կեղտոտ է, լվացեք այն օճառաջրի մեջ `ճարպը և կեղտը հեռացնելու համար: Ախտահանեք սահիկը էթանոլով, ապակու մաքրիչով կամ ցանկացած մեթոդով, որը խորհուրդ է տրվում ձեր լաբորատորիայի կողմից:

Գրամի բիծ Քայլ 3
Գրամի բիծ Քայլ 3

Քայլ 3. Ավելացրեք նմուշը սլայդին:

Դուք կարող եք օգտագործել Գրամի բիծի մեթոդը, որն օգնում է բացահայտել բժշկական նմուշներում առկա բակտերիաները կամ բուտերի մշակաբույսերը, որոնք աճեցվել են Պետրիի ամանի մեջ: Որպեսզի Գրամի բիծը օգտակար լինի, ավելացրեք ա բարակ նմուշի շերտը բիծի վրա: Առաջարկվում է 24 ժամից ցածր նմուշ, քանի որ ավելի հին բակտերիաները կարող են վնասել բջիջների պատերը, որոնք ավելի քիչ կանխատեսելիորեն են արձագանքում գրամի ներկմանը:

  • Եթե օգտագործում եք հյուսվածքի նմուշ, 1-2 կաթիլ ավելացրեք ապակու սահնակին: Այն հավասարաչափ տարածեք սահիկի վրա ՝ բարակ քսուք ձևավորելու համար ՝ օգտագործելով երկրորդ ստերիլիզացված ապակու սահիկի եզրը: Շարունակելուց առաջ թույլ տվեք այն չորացնել օդում:
  • Եթե դուք մանրէներ եք վերցնում petri- ից, ստերիլիզացրեք պատվաստման օղակը Bunsen այրիչի կրակի մեջ, մինչև այն պայծառանա, այնուհետև թողեք սառչի: Օգտագործեք այն, որպեսզի մի կաթիլ ստերիլ ջուր տեղադրեք սահիկի վրա, այնուհետև մանրէազերծեք և նորից սառեցրեք օղակը, նախքան մանրէների փոքրիկ նմուշը փոխանցելը և ջրի մեջ մեղմորեն խառնելը:
  • Արգանակի մեջ գտնվող բակտերիաները պետք է խառնվեն պտույտի մեջ, այնուհետև ավելացվեն պատվաստման օղակով, ինչպես վերևում, առանց ավելորդ ջուր ավելացնելու:
  • Եթե ունեք շվաբրերի նմուշ, թեթևակի գլորեք շվաբրը սահիկի վրայով:
Գրամի բիծ Քայլ 4
Գրամի բիծ Քայլ 4

Քայլ 4. Heերմությամբ ամրացրեք քսուքը:

Heերմությունը բակտերիաները կպցնի սահիկին, այնպես որ դրանք այդքան հեշտությամբ չեն լվանում բիծի ժամանակ: Արագ անցեք սահիկը երկու -երեք անգամ Բունսենի այրիչի կրակի միջով կամ տաքացրեք այն էլեկտրական սլայդերի տաքացուցիչի վրա: Մի տաքացեք, հակառակ դեպքում նմուշները կարող են աղավաղվել: Եթե Bunsen այրիչ եք օգտագործում, կրակը պետք է լինի փոքր, կապույտ կոն, այլ ոչ թե բարձր նարնջագույն:

Այլապես, քսուքը կարող է ամրագրվել մեթանոլով `չորացրած քսակի վրա 1-2 կաթիլ մեթանոլ ավելացնելով, ավելորդ մեթանոլը չորացնելով և թույլ տալով չորացնել օդում: Այս մեթոդը նվազագույնի է հասցնում հյուրընկալող բջիջների վնասը ՝ տալով ավելի մաքուր ֆոն:

Գրամի բիծ Քայլ 5
Գրամի բիծ Քայլ 5

Քայլ 5. Տեղադրեք սահիկը լաքապատ սկուտեղի վրա:

Ներկման սկուտեղը մակերեսային մետաղյա, ապակե կամ պլաստմասե ափսե է, որի վերևով անցնում է մի փոքր ցանց կամ մետաղալար: Տեղադրեք սահիկը այս հենարանի վերևում, այնպես որ հեղուկը, որը դուք կօգտագործեք, կարող է թափվել սկուտեղի մեջ:

Եթե դուք չունեք ներկող սկուտեղ, սահիկը կարող է տեղադրվել անմիջապես պլաստմասե սառցաբեկորների սկուտեղի վերևում:

Մաս 2 -ից 3 -ից ՝ Գրամի բիծը կատարելը

Գրամի բիծ Քայլ 6
Գրամի բիծ Քայլ 6

Քայլ 1. Լցնել բիծը բյուրեղյա մանուշակով:

Օգտագործեք խողովակ ՝ բակտերիաների նմուշը բյուրեղյա մանուշակագույն ներկի մի քանի կաթիլներով լցնելու համար, որը երբեմն կոչվում է գենտիական մանուշակ: Սպասեք երեսունից վաթսուն վայրկյան: Բյուրեղյա մանուշակը (CV) ջրային լուծույթներում բաժանվում է CV+ և քլորիդ (Cl–) իոնների: Այս իոնները ներթափանցում են ինչպես գրամ-դրական, այնպես էլ գրամ-բացասական բջիջների բջջային պատի և բջջային թաղանթի միջով: CV+ իոնը փոխազդում է բակտերիալ բջիջների բացասական լիցքավորված բաղադրիչների հետ ՝ բջիջները մանուշակագույն ներկելու համար:

Շատ լաբորատորիաներում օգտագործվում է «Հաքերի» բյուրեղյա մանուշակը, որն ավելացնում է ամոնիումի օքսալատը ՝ տեղումները կանխելու համար:

Գրամի բիծ Քայլ 7
Գրամի բիծ Քայլ 7

Քայլ 2. Մեղմորեն լվացեք բյուրեղյա մանուշակը:

Թեքեք սահիկը և օգտագործեք լվացքի շիշ `սահիկի վերևում թորած կամ ծորակից ջրի մի փոքր հոսք: Theուրը պետք է հոսի վարակի մակերեսի վրայով, բայց չուղղվի անմիջապես դրան: Չափից դուրս մի ողողեք, ինչը կարող է հեռացնել բիծը Գրամ դրական բակտերիաներից:

Գրամի բիծ Քայլ 8
Գրամի բիծ Քայլ 8

Քայլ 3. Լցնել քսուքը յոդով, ապա լվանալ:

Aածկույթը յոդով ծածկելու համար օգտագործեք ծխամորճ: Թողեք այն մնա առնվազն 60 վայրկյան, ապա լվացեք նույն զգուշավոր մեթոդով: Յոդը, բացասական լիցքավորված իոնների տեսքով, փոխազդում է CV+ - ի հետ ՝ բջջի ներքին և արտաքին շերտերի ներսում ձևավորելով բյուրեղյա մանուշակի և յոդի մեծ համալիրներ (CV – I համալիրներ): Սա կպահի մանուշակագույն բյուրեղյա մանուշակագույն գույնը բջիջում, որտեղ էլ որ այն ներկված լինի:

Յոդը քայքայիչ է: Խուսափեք ինհալացիաից, կուլ տալուց կամ մաշկի հետ շփումից:

Գրամի բիծ Քայլ 9
Գրամի բիծ Քայլ 9

Քայլ 4. Ավելացրեք գունազերծիչ, ապա արագ լվացեք:

Այս կրիտիկական քայլի համար սովորաբար օգտագործվում է ացետոնի և էթանոլի 1: 1 խառնուրդ, որը պետք է ժամանակին զգուշորեն սահմանվի: Սահիկը պահեք անկյան տակ, այնուհետև ավելացրեք գունազերծիչը, մինչև որ թափվող արտահոսքի մեջ այլևս մանուշակագույն գույն չերևա: Սովորաբար դա տևում է 10 վայրկյանից պակաս կամ նույնիսկ ավելի քիչ ժամանակ, եթե գունազերծիչը պարունակում է ացետոնի ավելի մեծ կոնցենտրացիաներ: Անմիջապես դադարեցրեք, այլապես գունազերծիչը կվերացնի բյուրեղյա մանուշակագույն բիծը և գրամ-դրական, և բացասական բջիջներից, և բիծը պետք է կրկնվել: Անմիջապես ողողեք ավելորդ գունազերծիչը ՝ օգտագործելով ավելի վաղ տեխնիկան:

  • Դրա փոխարեն կարող է օգտագործվել մաքուր (95%+) ացետոն: Որքան ավելի շատ ացետոն կա, այնքան ավելի արագ կաշխատի գունազերծիչը ՝ պահանջելով ավելի ճշգրիտ ժամկետներ:
  • Եթե դժվարանում եք այս քայլի ժամանակացույցը կատարել, մտածեք կաթիլ -կաթիլ ավելացնել գունազերծիչը:
Գրամի բիծ Քայլ 10
Գրամի բիծ Քայլ 10

Քայլ 5. Լցնել արատը հակաթույնով, ապա լվանալ:

Հակամետրանյութը, սովորաբար սաֆրանինը կամ ֆուկսինը, օգտագործվում է գրամ-բացասական և գրամ-դրական բակտերիաների լրացուցիչ հակադրություն ավելացնելու համար `գունավոր (գրամ-բացասական) բակտերիաները վարդագույն կամ կարմիր ներկելով: Թողեք այն առնվազն 45 վայրկյան, ապա լվացեք:

Ֆուկսինը շատ ավելի գրամ-բացասական բակտերիաներ է ներկելու ավելի ինտենսիվորեն, ինչպիսիք են ՝ հեմոֆիլուսը և լեգիոնելլան: Սա կարող է այն ավելի լավ տարբերակ դարձնել սկսնակների համար:

Գրամի բիծ Քայլ 11
Գրամի բիծ Քայլ 11

Քայլ 6. Չորացրեք սահիկը:

Դուք կարող եք թույլ տալ, որ սահիկը չորանա օդում կամ չորանա `օգտագործելով այս նպատակով վաճառվող աստվածաշնչյան թուղթը: Գրամի բիծն ավարտված է:

3 -րդ մաս 3 -ից. Արդյունքի ուսումնասիրություն

Գրամի բիծ Քայլ 12
Գրամի բիծ Քայլ 12

Քայլ 1. Պատրաստեք լուսային մանրադիտակը:

Տեղադրեք սահիկը լուսային մանրադիտակի տակ: Մանրէները մեծապես տարբերվում են չափերով, ուստի պահանջվող ընդհանուր խոշորացումը կտատանվի 400x- ից 1000x: Այս խոշորացման ավելի բարձր ծայրում խորհուրդ է տրվում նավթի ընկղմման օբյեկտիվ ոսպնյակ `ավելի մեծ հստակության համար: Տեղադրեք ընկղմվող յուղի մի կաթիլ սահիկի վրա `խուսափելով շարժվելուց` փուչիկները կանխելու համար: Տեղափոխեք մանրադիտակային պտուտահաստոցը, որպեսզի օբյեկտիվ ոսպնյակը սեղմի իր տեղը ՝ դիպչելով յուղին:

Յուղի ընկղմումը կարող է օգտագործվել միայն հատուկ նախագծված ոսպնյակների վրա, այլ ոչ թե «չոր»:

Գրամի բիծ Քայլ 13
Գրամի բիծ Քայլ 13

Քայլ 2. Բացահայտեք գրամ-դրական և գրամ-բացասական բակտերիաները:

Ուսումնասիրեք սահիկը լուսային մանրադիտակով: Գրամ-դրական բակտերիաները հայտնվում են մանուշակագույն ՝ բյուրեղյա մանուշակի պատճառով, որը թակարդված է բջիջների հաստ պատերի ներսում: Գրամ-բացասական բակտերիաները հայտնվում են վարդագույն կամ կարմիր, քանի որ մանուշակը լվացել է բջիջների բարակ պատերով, այնուհետև վարդագույն հակամշակումը ներթափանցել է դրանց մեջ:

  • Եթե նմուշը չափազանց հաստ է, կարող եք կեղծ դրական արդյունքներ տեսնել: Ներկեք նոր նմուշ, եթե բակտերիաների բոլոր տեսակները գրամ-դրական են, որպեսզի համոզվեք, որ արդյունքը ճիշտ է:
  • Եթե գունազերծիչը չափազանց երկար աշխատեց, կարող եք կեղծ բացասական արդյունքներ տեսնել: Ներկեք նոր նմուշ, եթե բակտերիաների բոլոր տեսակները գրամ-բացասական են `ձեր արդյունքները կրկնակի ստուգելու համար:
Գրամի բիծ Քայլ 14
Գրամի բիծ Քայլ 14

Քայլ 3. Փնտրեք տեղեկատու պատկերներ:

Եթե համոզված չեք, թե ինչ է բակտերիան, դիտեք տեղեկատու պատկերների հավաքածուն ՝ դասավորված ըստ գրամի բիծի ձևի և արդյունքի: Դուք կարող եք առցանց տվյալների շտեմարաններ գտնել Մանրէաբանական պաթոգենների ազգային շտեմարանում և շատ այլ կայքերում: Նույնականացումն ավելի դյուրին դարձնելու համար սովորական կամ ախտորոշիչ առումով կարևոր օրինակները դասակարգվում են ստորև ՝ ըստ գրամի կարգավիճակի և ձևի:

Գրամի բիծ Քայլ 15
Գրամի բիծ Քայլ 15

Քայլ 4. Բացահայտեք գրամ-դրական բակտերիաները ըստ ձևի:

Մանրէների տակ մանրէները հետագայում դասակարգվում են ըստ ձևի, առավել հաճախ ՝ կոկսի (գնդաձև) կամ ձողերի (գլանաձև): Ահա մի քանի սովորական գրամ դրական (մանուշակագույն ներկված) մանրէներ, որոնք կազմակերպված են ըստ ձևի.

  • Գրամ-դրական կոկիկներ ընդհանրապես կամ ստաֆիլոկոկներ են (նշանակում է կոկտեր կլաստերներում) կամ ստրեպտոկոկներ (նկատի ունի շղթաներով կոկոսներ):
  • Գրամ-դրական ձողեր ներառում են Bacillus, Clostridium, Corynebacterium և Listeria: Actinomyces spp. ձողերը հաճախ ունենում են ճյուղեր կամ թելեր:
Գրամի բիծ Քայլ 16
Գրամի բիծ Քայլ 16

Քայլ 5. Բացահայտեք գրամ-բացասական բակտերիաները:

Գրամ-բացասական (վարդագույն ներկով) բակտերիաները հաճախ դասակարգվում են երեք խմբի. Կոկերը գնդաձև բակտերիաներ են, ձողերը ՝ երկար, բարակ բակտերիաներ, իսկ կոկոիդ ձողերը ՝ ինչ -որ տեղ:

  • Գրամ-բացասական կոկիկներ առավել հաճախ Neisseria spp են:
  • Գրամ-բացասական ձողեր ներառում են E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, Pseudomonas և շատ ուրիշներ: Vibrio cholerae- ն կարող է հայտնվել սովորական ձողերի կամ կորացած ձողերի տեսքով:
  • Գրամ-բացասական «կոկոիդ» ձողեր (կամ «կոկոբացիլներ») ներառում են Բորդետելլան, Բրյուսելան, Հեմոֆիլուսը և Պաստերելլան:
Գրամի բիծ Քայլ 17
Գրամի բիծ Քայլ 17

Քայլ 6. Գնահատեք խառը արդյունքները:

Որոշ մանրէներ դժվարությամբ են ճշգրիտ ներկվում ՝ դրանց բջջային պատերի փխրունության կամ մոմի պատճառով: Նրանք կարող են ունենալ մանուշակագույն կամ վարդագույն բծերի խառնուրդ միևնույն բջիջում կամ նույն բջջի տարբեր բջիջների միջև: 24 ժամից ավելի ցանկացած բակտերիայի նմուշ կարող է ունենալ այս խնդիրը, սակայն որոշ տեսակների դժվար է բծեր ցանկացած տարիքում: Նրանք կարող են պահանջել ավելի մասնագիտացված թեստեր `նույնականացումը նվազեցնելու համար, ինչպիսիք են թթվային արագ բիծը, մշակույթի աճի դիտարկումը, TSI միջին մշակույթները կամ գենետիկական փորձարկումները:

  • Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium, and Propionibacterium spp. բոլորը համարվում են գրամ-դրական բակտերիաներ, բայց հաճախ հայտնվում են անորոշ կերպով ներկված:
  • Փոքր և բարակ մանրէներ, ինչպիսիք են Treponema- ն, Chlamydia- ն և Rickettsia spp- ն: դժվար է ճիշտ գրամ-ներկել:
Գրամի բիծ Քայլ 18
Գրամի բիծ Քայլ 18

Քայլ 7. Նետեք նյութերը:

Թափոնների հեռացման ընթացակարգերը տարբերվում են լաբորատորիաներից և ըստ օգտագործվող նյութերի: Սովորաբար, ներկման սկուտեղի հեղուկը թափվում է կնքված շշերի մեջ `որպես վտանգավոր թափոն: Ներծծեք սահիկները 10% սպիտակեցնող լուծույթի մեջ, այնուհետև դրանք թափեք կտրուկ տարաներում:

Խորհուրդներ

  • Հիշեք, որ գրամի բիծի բերքատվությունը նույնքան լավն է, որքան նմուշը: Կարևոր է հիվանդներին սովորեցնել լավ նմուշներ տրամադրել (օրինակ ՝ թուքից և խորխի տարբերությունը թուքների նմուշների համար):
  • Որպես գունազերծիչ, էթանոլը ավելի դանդաղ է գործում, քան ացետոնը:
  • Հետևեք ստանդարտ լաբորատոր նախազգուշական միջոցներին:
  • Գործնականում օգտագործեք այտերի շվաբր, քանի որ նմուշը պետք է պարունակի ինչպես գրամ-դրական, այնպես էլ գրամ-բացասական բակտերիաներ: Եթե տեսնում եք միայն այս կամ այն տեսակը, ապա, ամենայն հավանականությամբ, շատ քիչ կամ շատ գունազրկող եք օգտագործում:
  • Սահիկը բռնելու համար կարող եք օգտագործել գարնանային տիպի փայտե հագուստի ամրակ:

Գուշացումներ

  • Ացետոնը և էթանոլը դյուրավառ են: Ացետոնը ձեր ձեռքերից կհեռացնի յուղերը ՝ ձեր մաշկին ավելի հեշտ կլանելով այլ քիմիական նյութեր: Հագեք ձեռնոցներ և օգտագործեք զգուշությամբ:
  • Թույլ մի տվեք, որ արատը չորանա, նախքան բիծը կամ հակաթույնը լվանալը:

Խորհուրդ ենք տալիս: